Строничка. Аквариумная и не только.
Понедельник, 20 Мая 2019, 07:35
Меню сайта

Поиск

Новые сообщения · Участники · Поиск
  • Страница 8 из 8
  • «
  • 1
  • 2
  • 6
  • 7
  • 8
Строничка » Песочница » Пезделицы » Мелкоскопический вопрос (спасите спасите Фенёчик ау)
Мелкоскопический вопрос
фенекДата: Воскресенье, 29 Марта 2015, 14:03 | Сообщение # 106
Почтенные
Offline
Цитата Pantagruel ()
А что скажешь о качестве? Достаточное?

Если с точки зрения цитологии, то вполне удовлетворительное. С точки зрения цитогенетики не ясно - ты ведь не получил хромосомных препаратов. Но думаю, когда методика будет отработана, со стороны оптики, камеры и изображения проблем особых не будет.

Цитата Pantagruel ()
То есть, опять возвращаемся к луку и надо посмотреть. Если да, то конечно, придётся менять краситель.
Думаю, это правильное решение. Сравнить результат стандартной методики и методики по Пантагрюэлю нужно на уже изученном образце. А потом уже переходить к криптам или чему-то еще.
_
 
PantagruelДата: Воскресенье, 29 Марта 2015, 22:00 | Сообщение # 107
Одмине
Offline
Как у истиннаго аквареумиста, луковых корней у меня не нашлось, а нашлись наясовые. Они растут довольно активно, и я понадеялся найти там пластинки. Ни пса не нашёл, конечно, зато проверил одно предположение - что промывка водой после окрашивания не годится. Оболочку клетки нужно сделать по возможности прозрачной, поэтому для промывки неплохо использовать ту же среду, что применялась как растворитель. Поэтому выдержал образцы после окрашивания 15 минут в 50% метилуксусной.

Результат оказался неплох, во всяком случае внутриклеточные объекты различимы лучше, чем в прошлом опыте, и в межклеточном пространстве не заметно подтёков от диффундирующего из препарата красителя.



Вот таких крапчатых клеток видел целые ряды. Похоже на хлоропласты, а ведь это корешки. Впрочем, почему бы нет - зеленоватые корни не редкость, и не только у наяса.



Вот на таких чудовищ посмотрел:



И на таких:





И на дохлые водоросли:



Выпалывал сегодня стрелолисты и обратил внимание на корешки - толстые почти как у лука, да и растут они довольно быстро. Ген огородника во мне почему-то не активен, а ген аквариумиста подзуживает в следующий раз посмотреть именно на них.
_
 
фенекДата: Понедельник, 30 Марта 2015, 00:41 | Сообщение # 108
Почтенные
Offline
Вот на четвертой и пятой фотографии хорошо просматривается одно явление - плазмолиз. Это говорит о том, что клетки побывали в гипертоническом растворе. Причем, чем раствор гипертонистее, тем сильнее скукоживается протоплат.

Цитата Pantagruel ()
Они растут довольно активно, и я понадеялся найти там пластинки.

Еще одна прелесть колхицина, исходящая из разрушения им веретена деления, заключается в том, что все делящиеся клетки, вернее - хотящие поделиться, он подводит к общему знаменателю - метафазе. Т.е. если клетки находятся на любой стадии пред-деления, они спокойно продолжат процесс вплоть до формирования веретена. В это время хромосомы уже оформлены для исследования, а веретено разрушено и дальше митоз клетки продолжать не могут. Они "поджидают", когда к этому же состоянию придут и другие клетки, немного запоздавшие с делением.
Я это к тому, что без колхицина даже в активно растущем корне можно увидеть лишь единичные метафазы, если повезет, тогда как клеток на разных стадиях деления вообще может быть много. Но по ним можно только констатировать факт роста и определить фазу митоза - никак не хромосоный анализ. С применением колха метафаз становится в разы больше.

Цитата Pantagruel ()
Вот таких крапчатых клеток видел целые ряды. Похоже на хлоропласты, а ведь это корешки. Впрочем, почему бы нет - зеленоватые корни не редкость, и не только у наяса.
Хлоропласты имеют свойство трансформироваться из одной формы в другую. Зеленые фотосинтезируют и при достаточном свете преобладают. Но могут преобразоваться в красно-желтые, а последние служат запасниками питательных веществ. В корнях им самое место.
 
PantagruelДата: Понедельник, 30 Марта 2015, 06:26 | Сообщение # 109
Одмине
Offline
Ухтыухты. Сколько интересного. Между прочим, ещё одна причина приобрести таки именно колхицин, потому что бес периодически толкает меня под локоть, дескать купи-ка дешёвый циклофосфан.

Цитата фенек ()
Но могут преобразоваться в красно-желтые, а последние служат запасниками питательных веществ. В корнях им самое место.

Уточню, что запасниками крахмала в корнях служат амилопласты и да, они могут трансформироваться в хлоропласты, если корни находятся на свету и в этом имеется смысл. А вот красно-жёлтые это хромопласты, и они запасниками не служат.

Плазмолиз, хм-хм-хм nda
Надо приготовить для промывки и микроскопирования отдельный раствор пониженной концентрации.
_
 
PantagruelДата: Среда, 01 Апреля 2015, 18:02 | Сообщение # 110
Одмине
Offline
Цитата фенек ()
Колх ... способствует более сильной компактизации хроматина. Т.е. пересыпал его - получил не нормальные продолговатые хромосомы с плечами и центромерами, а плотные квадратики или шарики, которые разве что только посчитать.

Я тут подумал, почему же в немалом количестве рекомендаций так несерьёзно относятся к колхицину. Скорее всего потому, что большая их часть относится к исследованиям в области с/х растениеводства, а там не редкость такая ситуация, когда вид точно известен, а требуется только определить плоидность, то бишь именно "просто посчитать".
 
фенекДата: Пятница, 03 Апреля 2015, 00:46 | Сообщение # 111
Почтенные
Offline
Для с/х - вполне возможно "просто посчитать" достаточно, хотя возможности ЦГ гораздо шире. Но у меня сложились другие представления об области применения колх... Видимо все определяется задачами и интересами.
 
PantagruelДата: Воскресенье, 05 Апреля 2015, 20:20 | Сообщение # 112
Одмине
Offline
Сегодня пробовал вместо корешков препарировать побег стрелолиста, точнее выделить для микроскопирования участок, наиболее всего соответствующий точке роста. По аналогии с одной из описанных методик - препарированием молодых листочков пшеницы. Однако, не преуспел.

Во-первых, структура тканей столона, точки роста и листового зачатка иная, чем у корешка. Для корешка нетрудно подобрать методику и соблюсти экспозиции и прочее, потому что сами образцы достаточно однотипны и отличаются незначительно. А точка роста имеет более сложное строение, и состоит из нескольких типов тканей с разной проницаемостью и физическими характеристиками. Это приводит к некачественному окрашиванию препарата, неудовлетворительной промывке, неравномерному воздействию реактивов на препарат.

Во-вторых, кончик столона обладает гораздо большей толщиной, чем кончик корешка, что в значительной степени усугубляет вышеописанные эффекты.

Скорее всего, эти неприятности можно было бы решить микротомированием, но в мои задачи входит максимальное упрощение методики для того, чтобы сделать её доступной в домашних, а не лабораторных условиях. А кроме того, включение микротомирования в методику означало бы точную отработку экспозиций, температурных режимов, техники препарирования и тому подобных вещей, что представляет собой опять же серьёзную лабораторную работу.

Поэтому остановлюсь таки на корешках. Кстати, для меня оказалась сложной такая тривиальная вещь как распределение препарата в монослой. Для этого нужно иметь довольно набитую руку, потому что препарат легко как недодавить, получив на стекле непроглядный ковёр, так и передавить, раскатав клетки в кашу. Причём, для появления "каши" даже не обязательно раздавить много клеток - достаточно разрушить процентов двадцать, чтобы сделать препарат совершенно непригодным для наблюдений. И это ещё один субъективный плюс в сторону корешков, поскольку я к ним уже несколько приноровился.
_
 
PantagruelДата: Воскресенье, 12 Апреля 2015, 10:39 | Сообщение # 113
Одмине
Offline
Ализариновый красный С вам не луковые шкуры buba


_
 
PantagruelДата: Суббота, 05 Декабря 2015, 09:07 | Сообщение # 114
Одмине
Offline
Декабрь. Пора зимних забав вроде микроскопии. Однако, целый ряд различных препятствий вынуждает меня отказаться от дальнейших поползновений в области определения кариотипа криптокорин и прочих растений. Препятствует как недостаточная материальная база, так и несоответствие ценности возможного результата количеству прилагаемых усилий и временны́х затрат.

С переходом на Линукс я столкнулся с отсутствием драйверов для камеры микроскопа, а также с отсутствием соответствующего ПО для работы с ней. Можно было бы, конечно, поставить винду второй системой, но ради таких мелочей, как удобство микроскопирования, я этого делать не стану. Как результат, приходится работать с камерой, используя маленький экран нетбука, что весьма препятствует хорошей фокусировке. Проблема усугубляется тем, что мой достаточно бюджетный микроскоп подразумевает установку камеры вместо окуляра, после чего скорректировать резкость картинки иначе, как через вид на экране, невозможно. Специфика же поставленной задачи подразумевает именно фиксацию наблюдений на фото и дальнейшую работу со снимками. Было бы лучше, приобретая микроскоп, подкопить ещё деньжат и взять модель со встроенной камерой. Утешает меня в этом отношении лишь то, что стремление к совершенству в данном случае приближается к бесконечности, и приобрести по-настоящему хороший микроскоп я при всём желании не мог бы себе позволить.

К сожалению, только технической стороной дело не ограничивается. Замена классических реактивов на альтернативные не гарантирует хорошего результата, а использование отработанных методик предполагает применение веществ, часть из которых частное лицо может приобрести только нелегально. Собственно, уже одно это в достаточной мере дискредитирует основную идею - о доступности таких исследований в домашних условиях.

И в заключение - о ценности возможного результата. Я долго валял и переваривал мысль, высказанную в своё время Crypto - о том, кому может быть практически интересна методика точного определения вида и плоидности криптокорин, ради чего собственно всё и было затеяно. Подчеркну - я имею в виду именно прикладную, практическую ценность, поскольку "просто почитать" понятно, всякому интересно. Мы тогда сошлись во мнении, что это весьма узкий круг любителей. Причём ни я, ни Crypto сами даже не принадлежим к числу сугубых фанатов криптокорин, и можем смириться с тем, что в наших аквариумах присутствуют некие виды и полиплоиды, принадлежность которых может быть определена не точно, а лишь вероятностно. Точное знание в данном случае, конечно, весьма хорошо и приятно, но не сказать чтобы необходимо.

В общем, учитывая вышеприведённые факторы, от дальнейшей отработки методики кариотипирования я решил отказаться.
_
 
Строничка » Песочница » Пезделицы » Мелкоскопический вопрос (спасите спасите Фенёчик ау)
  • Страница 8 из 8
  • «
  • 1
  • 2
  • 6
  • 7
  • 8
Поиск: